□广州市第一人民医院鹤洞分院 邓穗德副主任技师
血浆氨基酸测定
正常情况下,肠道内的苯丙氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸经肠道细菌的氨基酸脱羧酶作用而形成相应的酪胺及苯乙胺,再经门静脉被肝内单胺氧化酶分解而清除。当肝功能不全或门体静脉短路的情况下,引起体内氨基酸代谢异常;出现肝内胰岛素的灭活发生障碍,在高水平胰岛素作用下,主要在肌肉组织中代谢的支链氨基酸大量进入肌肉组织被分解,致使血浆中的支链氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸)浓度略显降低。而肝内单胺氧化酶活性降低,形成芳香族氨基酸(苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸)明显增高,在体循环中通过血脑屏障入脑,经脑内非特异性羟化酶作用苯乙胺及酪胺经羟化作用分别生成苯乙醇胺和β-多巴胺,两者的化学结构与儿茶酚胺类递质(多巴胺、去甲肾上腺素)结构相似,但不能传递神经冲动或作用很弱,而色氨酸的增多又合成较多的抑制性递质5-羟色胺,皆与去甲肾上腺素相拮抗,使中枢神经转入抑制。若脑干网状结构上行激动功能发生异常抑制而导致昏迷。为此,测定某些氨基酸的含量及支/芳比值的变化具有重要的临床诊疗及预后判断价值。
(一)氨基酸测定方法
1.氨基酸的化学测定。2.氨基酸酶法分析。3.氨基酸色谱分析:具体包括
①氨基酸薄层层析:薄层层析法分为单向和双向两种;单向层析适用于某一个或某一组增高的筛选分析。若异常结果需进一步使用双向层析分离或其他检测方法定量证实。单向和双向的薄层分析均可定性检测氨基酸的异常变化。双向色谱法能分辨全部氨基酸,能作为确诊的参考依据。
②氨基酸自动分析法:氨基酸自动分析仪主要由控制系统、自动加样系统、色谱系统、检测系统和数据处理系统五个部分组成。而检测系统内包括反应器、比色计或荧光计以及记录器。从离子交换色谱柱上先将不同的氨基酸分离、洗脱,与茚三酮试剂混合并在反应器上加热。亚氨基酸(脯氨酸和羟脯氨酸)与茚三酮反应产生黄色化合物,最高吸收峰在440nm波长处。而氨基酸与茚三酮解热生成紫色化合物,最高吸收峰在570nm波长处。茚三酮检测方法的最小检出量为nmol水平。目前,有部分新型氨基酸自动分析仪的检测系统用荧光法代替比色法,可检出pmol水平的氨基酸。常用的荧光是邻苯二醛,但与亚氨基酸不反应,须加入次氯酸钠作氧化剂才发生荧光反应。荧光的激发波长为340nm,发射光波长为455nm。
(二)临床意义
肝性脑病患者血浆支链氨基酸与芳香氨基酸比值明显降低;健康对照组为4.0,慢性肝功能不全者为0.9,急性肝功能不全者为0.8,降低幅度与肝性脑病的发生呈平行关系。
小 结
肝性脑病是各种严重肝病并发症或终末期表现,是以代谢紊乱为基础、意识障碍或昏迷为主要表现的中枢系统综合征。当前医院实验室生化检测尚缺乏特异性指标,其检验项目的选择仍沿用氨中毒、假神经递质、氨基酸失衡和短链脂肪酸中毒等肝昏迷学说的主要观点。
实验室的肝功能检查项目种类繁多,单项指标仅能反映肝脏功能或肝病变的某一侧面,不能反映肝脏功能全部,而且每个实验的设备条件、灵敏度、特异性、选择性和方法学所致的参考范围及影响因素都各不相同。所以应根据实验室的具体情况及实验检查的目的,正确选择并合理组合检验项目,综合分析实验结果,这对正确评价患者肝脏功能,判断是否有肝病、肝病的类型、严重程度及愈后、疗效观察等是极其重要的。