□广州市第一人民医院鹤洞分院 邓穗德副主任技师
一﹑谷氨酸脱氢酶(GLD)
该酶作为一种线粒体酶,分子量为350 000,半寿期约16小时。肝内GLD的特异性是肾脏、脑、肺的10倍左右,是骨骼肌内的GLD的80倍左右。血浆内GLD活性的增高是来源于肝脏。然而,仅在细胞坏死时,才测出血浆GLD活性水平。此酶的生理功能在于谷氨酸的氧化脱氨作用。GLH在肝脏中央小叶内活力比门静脉周围部位高1.7倍。因此,与ALT比较而言,相对较高GLD浓度便可提示肝小叶中心部位发生病变。资料显示:连同氨基转移酶,GLD具有鉴别诊断的重要性。评价标准就是(ALT+AST)/GLD的比值。当阻塞性黄疸、胆汁性肝硬化、转移性肝病、急性肝缺氧性损伤时,比值<20。当慢性肝病急性发作、胆汁淤积性肝病时,比值在20~50之间。当急性病毒性肝炎(也就是胆汁淤积的一种形式)、急性酒精性肝炎时,比值>50。
由于GLD仅存在于线粒体内,不像ALT仅存在于细胞质内,而AST既存在细胞质也位于线粒体内,所以较轻的肝炎病例中GLD不会释出入血使GLD活性升高。只有在肝细胞坏死的肝病患时,大量的GLD才会释放就值得注意的病态。例如缺氧性肝病或毒性肝损害。GLD是一肝中特异性酶,也是实质细胞坏死的指标。而它的独立诊断的灵敏度仅为47%,故不能作为肝胆疾病的筛选试验。
(1)GLD(EC1.4.1.3)测定原理和方法
原理:GLD在NADH存在催化下,转移铵到-氧化谷氨酸上,形成谷氨酸和NAD+。在334、340或366nm处检测NADH吸光度值的下降速率,其与GLD的活性呈比例。
(2)参考范围及评价
DGKC方法 成年男性 成年女性
25℃ 4.0 3.0
37℃ 7.0 5.0
评价:①最佳条件25℃,334nm波长时的单位时间内吸光度值仅仅0.001的变化,故轻微升高而临床不合理解释的GLD应作检查。②在最适温度37℃条件可提高单位时间内吸光度值的变化,而且有较长的线性范围。
二.胆碱酯酶
胆碱酯酶水解乙酰胆碱已知有两个相关酶:①乙酰胆碱乙酰水解酶旧称特异性胆碱酯酶、真胆碱酯酶或胆碱酯酶I。它存在肺和脾内,但不存在血浆内。此酶仅水解胆碱酯类,并不水解芳基或烷基脂类。该酶在神经末梢完成乙酰胆碱的释放。从而调节神经冲动经过突触到末梢器官的传递。②乙酰胆碱酰基水解酶旧称非特异性胆碱酯酶、拟胆碱酯酶、苯甲酸胆碱酯酶、胆碱酯酶II或S型胆碱酯酶。它见于血浆、肝、肠粘膜等,乙酰胆碱酰基水解酶(ChE)不仅裂解胆碱酯类,还包括苯甲酰胆碱、丁酰胆碱、芳基和烷基脂类。不同的底物及不同的温度下水解均影响CHE活性的不一。ChE在血清中的功能尚未确知。
ChE的测定作为肝功能评估通常用乙酰硫胆碱作底物。用免疫化学方法测定ChE的浓度亦可。
肝病与CHE活性下降的相关性可作为可疑肝实质受损及器官功能受损的重要参考指标。资料显示:急性肝炎无并发症的病毒性肝炎不会引起ChE水平下降;坏死型时,活性可能会随病情严重程度而下降;在急性病毒性肝炎时,ChE正常比下降更常见;在慢性活动性肝炎中,ChE活性可以反映肝实质功能和蛋白质合成。ChE的主要意义在于监测在非活动性炎症反应的病例中,ALT、AST和GGT可能会回复到正常,而ChE会下降或维持在参考范围内较低水平,可能是唯一反映肝损伤的病理性标志。肝硬化是最常见的ChE低水平疾病。一项研究表明,此ChE的临床灵敏度和特异性各为88%,在一批为数1050名患者中检查,有25人为肝硬化,低于正常ChE的预期值仅为13%。相比正常ChE的预期值为99.7%。这意味着ChE不适于作为肝硬化的筛选试验。因为8个ChE低水平的患者中仅1个实际为肝硬化。从另一方面而言,ChE正常可以不排除肝硬化。当急性肝功能衰竭、暴发性肝损伤时,由于ChE半寿期长,有12~14天,在急性状态下,ChE的水平可能导致错误的有利评价。因测定值往往仍在参考范围内,并且于疾病的活动性无关。
(1)ChE(EC3.1.1.8)测定原理和方法
原理:以丁酰-乙酰或丙酰硫作为底物进行水解的方法与用乙酰胆碱作底物水解的方法比较,具有可比性。
丁酰硫胆碱 + H2O ChE 硫胆碱+酪酸
因而产生的硫胆碱可以通过显色反应测得。
(2)方法:
① 硫胆碱 + 5,5'二硫-双-2硝基苯(DTNB)
5-巯基硫胆碱-2-硝基苯 + 5-硫-2-硝基苯
在405或410波长测定吸光度而求得其ChE活性。
② 硫胆碱 + 2OH- + 2[Fe(CN)6]3 二硫胆碱 + H2O + [Fe(CN)6]4-
在405波长测定吸光度而求得其ChE活性。
(3)参考范围及临床意义
参考值:丁酰硫胆碱(37℃) 女性:3.93~10.8;
男性:4.63~11.5;
临床意义:ChE是一种肝的排泄酶,所以血清里的ChE活性取决于肝实质细胞的功能。通常作为肝脏合成功能的参考指标。